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色谱柱正确的清洗和再生小技巧分享

2020-05-25

      色谱柱是一种内有固定相用于分离混合物的柱管,多为金属或玻璃制作,有直管形、盘管形、U形管等形状,被广泛用于多个领域中。

  一、色谱柱的清洗方法
  1.以乙腈:水(1:9,v→乙腈→乙腈水(1:9,v依次冲洗,然后进行使用。
  2.多次使用后某些样品可能会吸附到入口筛板或填料上引起柱压升高伴随峰形展宽的现象。此时,可将色谱柱与检测器断开,将色请柱反接后进行冲洗。
  二、色谱柱的再生方法
  1.一般污染再生:
  2.蛋白污染再生:0.1的水溶液异丙醇(4:1,v→乙腈:异丙醇(1:2,wv内含0.1%)一水:异丙1:4,VM分别冲洗10~20倍柱体积。(注意每项过渡时,压力的控制,压力建议控制在1500psi以下,根据柱子的具体情况请自己优化流速)。
  三、色谱柱的应用:
  谱柱的分离效果取决于所选择的固定相,以及色谱柱的制备和操作条件。色谱是一种分离分析手段,分离是核心,因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好,分析速度快等。市售的用于Hplc的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等,其粒度一般为3,5,7,10μm等,柱效理论值可达5~16万/米。对于一般的分析只需5000塔板数的柱效;对于同系物分析,只要500即可;对于较难分离物质对则可采用高达2万的柱子,因此一般10~30cm左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。

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