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色谱柱的分离原理及作用机理

2020-07-03

  色谱柱适用于分析蛋白质多肽等生化样品。它柱效高,柱压低,经久耐用,代表性地反映了对产品生产过程的分步严格控制。且所选择的硅胶是经过严格质量监测的合格产品,粒度分布窄,颗粒表面均匀光滑,因而色谱柱柱效高,柱压却很低,并进一步延长了其使用寿命。
 
  一、色谱柱的分离原理:采用反相流动相体系,而按照正相顺序出峰。通过亲水性相互作用,可有效的分离反相色谱柱中因保留能力弱而难分离的强极性化合物。是一种分离机理,而具备这种分离机理的键合相种类非常多。在HILIC中,固定相是极性的,流动相中的水相部分表现为强洗脱溶剂,这与传统的反相色谱法完全相反。
 
  二、色谱柱的作用机理:
 
  可以被认为是反相液相色谱通过采用极性固定相来运行的。采用的流动相是含有少量水/缓冲盐或其他极性溶剂的高比例有机相。流动相中的水形成一个富水层被吸附在固定相表面,极性物质首先进入富水层得到保留。极性化合物是通过一个复杂的混合模式被保留的,包括:富水层和流动相之间的亲水分配、极性官能团和固定相间的氢键作用以及离子官能团的静电作用。当然,亲水分配是主要的保留模式。从保留机理来看,HILIC和反相色谱柱是有着非常大的差别的。

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