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色谱柱的反冲技术你了解吗?

发布日期: 2020-08-21
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  色谱柱上基本都有->标志,表示流动相的流动方向,有的在色谱柱上印有“Nerver Lot Flow in the OppositeDirection”字样,翻译成“决不能反冲”的意思,色谱柱可以反冲吗、色谱柱能不能反冲的问题争议很大,但在我们工作中,用色谱柱反冲技术修复色谱柱收到柱效提高、柱效恢复的效果。
 
  一、分析氨基酸的离子交换柱,使用一段时间反柱效明显下降,用NaOH活化,达不到要求,但用NaOH反冲活化可迅速恢复柱效,
 
  二、色谱柱使用一段时间后柱效下降,此时可拆下柱入口端螺帽,去掉1-2mm被污染填料,再用相同填料填满,然后用流动相反冲一下,可使柱效恢复,因反冲可以改善柱头死空间。
 
  三、因反冲可把沉积在过渡板上的细微颗粒冲走,有时也可用反冲技术使柱压降低。
 
  一些反冲色谱柱的方法:
 
  (1)如果是已经保存好的色谱柱:1.反向接柱,先用 95 水:5 乙腈 0.2 ml/min,冲 20 倍柱体积;然后用C4H8O,0.2 ml/min,冲 20 倍柱体积;然后用 95 乙腈:5 水,0.2 ml/min,冲 20 倍柱体积;2.正向接柱,用 65乙腈水保存色谱柱。
 
  (2)如果是刚走完样的色谱柱,那么请按照下列步骤进行:1.卸掉保护柱2.正向接柱,常规方法冲洗色谱柱(先 95水,后 95 乙腈或甲醇);3.反向接柱,先用 95 水:5 乙腈 0.2 ml/min,冲 20 倍柱体积;然后用C4H8O,0.2 ml/min,冲 20 倍柱体积;然后用 95 乙腈:5 水,0.2ml/min,冲 20 倍柱体积;4.正向接柱,用 65乙腈水保存色谱柱。
 
  注意:1.20 倍柱体积:2504.6mm 大概 80ml 1504.6mm 大概 48ml2.反向接柱时不要接检测器。
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