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多了解一些,才能更好地运用色谱柱

发布日期: 2021-03-15
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       色谱柱是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。它通过采用强极性固定性,并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。而这样的流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱的灵敏度。
  色谱柱的分离机制:
  分离机理在目前还存在着争议,主要包括以下三个方面:
  (1)分配机理
  (2)离子交换
  (3)偶极-偶极相互作用。更多的试验现象则表明HILIC色谱柱的保留机理包含氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应,很难将其区分开来。
  色谱柱影响保留的主要因素:
  普遍认为HILIC色谱柱保留行为受到多种参数的影响,如固定相的官能团、有机改性剂的含量、流速、柱温、流动相缓冲体系的pH值、缓冲盐的种类和浓度。
  影响样品在固定相上的保留行为的主要因素都是流动相中有机相的比例,例如乙腈的含量的增加会显着增加样品的保留因子。在HILIC色谱柱分离模式中,溶剂洗脱能力由弱到强为:丙酮<乙腈<异丙醇<乙醇<甲醇<水, 流动相中水是较强的洗脱溶剂。一般采用乙腈-水体系作为流动相,其中水相的比例为5%-40%以保证其显着的亲水作用。将流动相中的水相用甲醇、乙醇、异丙醇代替,随着流动相极性的减小,待测物在柱上的保留就会增强。
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