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分析黄曲霉素的几种通用的方法有几种?

发布日期: 2021-04-09
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  黄曲霉素是主要由黄曲霉寄生曲霉产生的次生代谢产物,在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉素的机率很高。是霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。黄曲霉素检测的通用方法有几种?
  1、薄层层析法
  薄层层析是在黄曲霉素研究方面应用很广的分离技术.自1990年它被列为AOAC (Association of Official Agricultural Chemists)标准方法,该方法同时具有定性和定量分析黄曲霉素的功能。
  2、液相色谱法
  液相色谱与薄层层析在许多方面具有相似性二者互相补充.通常用TLC进行前期的条件设定选择适宜的分离条件后再用LC进行黄曲霉素的定量测定。
  3、免疫化学分析方法
  (1) 免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和术-HPLC法
  免疫亲和柱法和酶联免疫吸附法虽然都可达到速简便效果但酶联免疫吸附法仅能检测单一毒素(如黄曲霉素B1)含量,而且易出现假阳性结果难以控制.免疫亲和柱法(包括荧光光度法和HPLC法)却能达到既定量准确又快速简便的要求。
  免疫亲和柱的使用可以避免传统TLC和HPLC的缺点,同时免疫亲和柱与TLC和HPLC法结合可以大大提高工作效率提高灵敏度和准确度。
  黄曲霉素免疫亲和柱-荧光光度计法是以单克隆免疫亲和柱为分离手段,用荧光计紫外灯作为检测工具的快速分析方法。它克服了TLC和HPLC法在操作过程中使用剧毒的真菌毒素作为标定标准物和在样品预处理过程中使用多种有毒,异味的有机溶剂毒害操作人员和污染环境的缺点.同时黄曲霉素免疫亲和柱-荧光光度计法分析速度快,一个样品只需10-15min,比传统方法快几个小时甚至几天时间;仪器设备轻便容易携带自动化程度高,操作简单直接读出测试结果,可以在小型实验或现场使用.可以进行黄曲霉素总量 (B1B2G1G2) 的测定检测限可达到1ug/kg,达到黄曲霉素标准限量值以下测定范围为1-300ug/kg。
  黄曲霉素免疫亲和柱-高效液相色谱法比传统的HPLC法更加安全可靠,灵敏度和准确度高。它采用单克隆抗体免疫技术可以*性地将黄曲霉素或其他真菌毒素分离出来,分离效率和回收率高。
  分析原理试样中的黄曲霉素用一定比例的甲醇/水提取液经过过滤稀释后,用免疫亲和柱净化以甲醇将亲和柱上的黄曲霉素淋洗下来,在淋洗液中加入溴溶液衍生以提高测定灵敏度,然后用荧光分光光度计进行定量。也可以将甲醇-黄曲霉素淋洗液的一部分注入HPLC中对黄曲霉素B1,B2,G1,B2分别进行定量分析.免疫亲和柱是用大剂量的黄曲霉素单克隆抗体固化在水不溶性的载体上然后装柱而成.该方法的测定范围0-300ug/kg。
  (2) 酶联免疫吸附法
  将已知抗原吸附在固态载体表面洗除末吸附抗原,加入一定量抗体与待测样品(含有抗原)提取液的混合液竞争培养后,在固相载体表面形成抗原抗体复合物.洗除多余抗体成分然后加入酶标记的抗球蛋白的第二抗体结合物,与吸附在固体表面的抗原抗体结合物相结合再加入酶底物。在酶的催化作用下,底物发生降解反应产生有色物质,通过酶标检测仪测出酶底物的降解量从而推知被测样品中的抗原量。
  (3) 微柱筛选法
  可以用来半定量测定各种食品中黄曲霉素B1,B2,G1,G2的总量。
  原理:样品提取液中的黄曲霉素被微柱管风硅镁型吸附层吸附后在波长365nm紫外光灯下显示蓝紫色荧光环,其荧光强度与黄曲霉素在一定的光密度范围内成正比例关系.若硅镁型吸附剂层未出现蓝紫色荧光则样品为阴性(方法灵敏度为5-10ug/kg).由于在微柱上不能分离黄曲霉素B1,B2,G1,G2,所以测得结果为总的黄曲霉素含量。
  (4) 一步式黄曲霉素检测金标试纸法
  一步式黄曲霉素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法。由此产生的一步式黄曲霉素快速检测试纸可在5-10分钟完成对样品中黄曲霉素的定性测定.借助黄曲霉素标准样品这种方法能估算黄曲霉素的含量,非常适用于现场测试和进行大量样品的初选。
  4、抵抗方法
  当然,这只是一项动物研究,对人体来说,叶绿素是不是也有同样的作用呢?叶绿素是一种极好的化学保护物质,对抗致癌物的作用非常有效,从减少吸收,到减少致癌物与遗传物质的作用,直到减少各组织的癌前病变出现,各环节都有明显的效果。
  5、快速辨别
  黄曲霉素是很苦的,食用花生、核桃等食物时如果感觉很苦,马上吐出来,并漱口。发霉的花生、核桃等都容易产生黄曲霉素。
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