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HPLC液相色谱仪技术入门者须知

发布日期: 2021-05-08
浏览人气: 194
        HPLC液相色谱仪广泛存在于当前应用和发展较广泛、较有潜力的领域,包括生物、医药、环境等方面,它适于易挥发、半挥发性有机小分子化合物的分析。
  HPLC液相色谱仪的技术原理:
  分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关,也与温度、压力有关。在不同的色谱分离机制中,K有不同的概念:吸附色谱法为吸附系数,离子交换色谱法为选择性系数 (或称交换系数),凝胶色谱法为渗透参数。但一般情况可用分配系数来表示。
  在条件(流动相、固定相、温度和压力等)一定,样品浓度很低时(Cs、Cm很小)时,K只取决于组分的性质,而与浓度无关。这只是理想状态下的色谱条件,在这种条件下,得到的色谱峰为正常峰;在许多情况下,随着浓度的增大,K减小,这时色谱峰为拖尾峰;而有时随着溶质浓度增大,K也增大,这时色谱峰为前延峰。因此,只有尽可能减少进样量,使组分在柱内浓度降低,K恒定时,才能获得正常峰。
  HPLC液相色谱仪色谱的特点:
  高压--压力可达150~300 kg/cm。色谱柱每米降压为75 kg/cm以上。
  高速--流速为0.1~10.0 mL/min。
  --塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。
  高灵敏度--紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。
  HPLC与经典液相色谱相比有以下优点:
  速度快--通常分析一个样品在15~30 min,有些样品甚至在5 min内即可完成。
  分辨率高--可选择固定相和流动相以达到合适分离效果。
  灵敏度高--紫外检测器可达0.01ng,荧光和电化学检测器可达0.1pg。
  色谱柱可反复使用--用一根色谱柱可分离不同的化合物。
  样品量少,容易回收--样品经过色谱柱后不被破坏,可以收集单一组分或做制备。
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