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色谱柱被污染后如何正确清洗?

发布日期: 2021-07-12
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  色谱柱度优化功能,或“GO”功能,把线性梯度转化成阶梯梯度,在已确认的洗脱峰附近,优化洗脱条件。先用一个小的色谱柱纯化一个小部分样品,一旦运行完毕,选择优化按钮。然后选择目标峰,一个新的,优化了的,基于梯度洗脱方法就自动产生了。选择一个新的色谱柱和收集支架,分离方法就根据新柱子的大小自动调整, 并准备运行。
 
  色谱柱污染后的清洗和再生:
 
  当柱子被污染,它的色谱行为和没被污染的柱子会有些不同。被污染的柱子能产生反压问题。被污染的反相柱子必须清洗和再生才能恢复原来的操作条件。
 
  再生被污染HPLC柱子的关键是知道污染物的性质并且能找到适当的溶剂来去除。如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的,利用简单的步骤来除去这些污染物往往能恢复其色谱行为。有时候,经过多次操作以后的色谱柱用90~100%的溶剂B(双溶剂反相系统中较强的溶剂)冲洗20个体积可以**污染物。例如,柱子中残留的脂质就能用非水溶剂如甲醇、乙晴、四氢呋喃。
 
  一般来说,所有的清洗方法都有类似的形式。所用的溶剂都是随溶剂强度增加,经常*后一个溶剂是非常疏水的(如醋酸乙酯甚至是烃),可以用来溶解非极性物质如脂质和油类。我们必须保证一系列溶剂中每个溶剂都能与下一个溶剂互混。清洗过程要结束时,必须借助一个中等强度能互混的溶剂而回到原始溶剂系统。例如,异丙醇是一个非常好的作为中间步骤的溶剂,因为它能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶。但是异丙醇粘度非常大,必须确保较低的流速以免使泵压过高。冲洗色谱柱时,冲洗液由色谱柱出液端直接接入废液瓶,不能流经检测池,以**测池被污染。
 
  反相色谱柱没有使用缓冲溶液,请使用以下溶剂系列再生:
 
  100%甲醇→100%乙腈→75%乙腈-25%异丙醇→100%异丙醇→100%二氯甲烷→100%正己烷→100%二氯甲烷→100%异丙醇→100%乙腈。
 
  反相色谱柱使用缓冲溶液,请使用以下溶剂系列再生:
 
  水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水。
 
  表 用来冲洗的溶剂体积、时间
 
  色谱柱尺寸  柱体积  所用溶剂的体积  冲洗时间
 
  150-4.6   2.5ml  50ml   50min
 
  250-4.6   4.2ml  80ml   80min
 
  每种溶剂至少冲洗20个柱体积。如250mm×4.6mmHPLC分析柱,可以用1ml/min的流速来冲洗,冲洗后使用没有缓冲的流动相进行平衡色谱柱。
 
  注:如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,说明色谱柱严重污染,冲洗溶剂可以用①0.05M稀硫酸,②二甲基亚砜(DMSO),③二甲基甲酰铵-水(50:50),用低于0.5ml/min的流速冲洗非常有效。
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