带您了解高效液相色谱系统的现场操作方法

更新时间:2023-03-15|  点击次数:423
  高效液相色谱是一种高效、精准的色谱分离技术,被广泛应用于药物分析、生化标志物检测、环境污染物检测等领域。下面将介绍高效液相色谱系统的操作方法。
 
  I.原料准备
 
  1.溶剂:高纯度有机溶剂,如纯度达到HPLC级别的甲醇、乙腈、乙醇等。
 
  2.样品:要求样品在水中溶解度较高,通常采用精密天平称取数毫克的样品,加入适量的有机溶剂中,并搅拌均匀。
 
  3.内标:内标的加入可提高分析方法的准确度和精确度,如对组蛋白酶结合位点的锌离子测定操作,可加入5-氧化-硫代硫糖酸(5-OSA)作为内标。
 
  II.仪器操作
 
  1.开机:打开HPLC系统电源,启动软件,确认参数设置无误。
 
  2.准备流动相:按照实验方案中流动相的比例将水、有机溶剂调配好。将混合好的流动相用过滤器过滤,并用气流除去气泡,以免影响仪器和分析结果。
 
  3.填充色谱柱:色谱柱是HPLC系统的核心部件。填充色谱柱前,将色谱柱和进样器、检测器与仪器连接好。将色谱柱加热至适宜的温度后,开启泵浦,将流动相通过色谱柱包层填充物,直至色谱柱内充满。
 
  4.样品处理:可采用样品预染色、前处理、提取等方法,以保证色谱分析数据的准确性和可靠性。
 
  5.样品进样:将样品针头插入进样口,将样品推入进样器中,通过手动或自动进样器,将样品送入色谱柱进行分离。
 
  6.检测:将检测器的信号记录下来,经过数据处理和分析,得出样品中目标分量的浓度或含量。
 
  III.实验结果分析
 
  1.结果判定:分析结果中,样品和内标物的峰形、峰高、保留时间等是判断分析结果是否准确、可靠的关键。
 
  2.分析数据处理:对于分析结果,应进行合理的数据处理和统计分析,通过计算、绘图等方法,得出样品中目标分量的含量、纯度等数据。
 
  综上所述,高效液相色谱操作方法需要严格按照实验方案进行,有机溶剂、样品、内标等原料的使用要求严格,同时要认真操作仪器,遵守维护要求,确保实验结果的准确性和可靠性。
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